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    大家好！今天普拉特澤生物繼續(xù)跟大家一起學(xué)習(xí)——巨噬細(xì)胞原代提取巨噬細(xì)胞原代提取是細(xì)胞生物學(xué)和免疫學(xué)研究中常用的一種技術(shù)，用于從生物體內(nèi)直接獲取具有生物活性的巨噬細(xì)胞。

以下是以小鼠為例的巨噬細(xì)胞原代提取方法的詳細(xì)步驟和注意事項：

一、實驗準(zhǔn)備

?●實驗動物?：選擇SPF級小鼠，確保實驗動物的健康狀態(tài)。

?●試劑準(zhǔn)備?：

①細(xì)胞培養(yǎng)基（如RPMI 1640、DMEM等）

②胎牛血清

③雙抗（青霉素和鏈霉素）

④巰基乙酸鹽肉湯（或其他巨噬細(xì)胞刺激物）

⑤PBS（磷酸鹽緩沖液）

⑥紅細(xì)胞裂解液（如需要）

?●器械準(zhǔn)備?：

①一次性注射器

②手術(shù)器械（如手術(shù)剪、眼科鑷、眼科剪等）

③離心管

④細(xì)胞培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶

二、巨噬細(xì)胞原代提取步驟

●腹腔巨噬細(xì)胞提?。?/span>

⒈?腹腔注射?：在實驗前三天，每天向小鼠腹腔注射1mL的3%巰基乙酸鹽肉湯，以刺激腹腔內(nèi)巨噬細(xì)胞的增殖。

⒉小鼠處理?：

⒊脫頸處死小鼠后，用75%酒精浸泡3-5分鐘進(jìn)行消毒。

⒋將小鼠仰臥固定于解剖板上，剪開腹部皮膚暴露腹膜。

?●腹腔灌洗?：

⒈用注射器吸取預(yù)冷的PBS（或含雙抗的細(xì)胞培養(yǎng)基）5mL，緩緩注入小鼠腹腔內(nèi)。

⒉輕揉小鼠腹部數(shù)次，使液體在腹腔內(nèi)充分流動。

⒊靜置3-5分鐘后，用注射器抽取腹腔灌洗液至離心管中。

?●細(xì)胞分離?：

⒈將收集的腹腔灌洗液進(jìn)行離心（1000 rpm，5-10分鐘），去除上清液。

⒉用含雙抗的細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，并計數(shù)。

?●細(xì)胞培養(yǎng)?：

⒈將細(xì)胞接種至細(xì)胞培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育2-4小時，使巨噬細(xì)胞貼壁。

⒉棄去未貼壁的細(xì)胞，更換新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

●骨髓巨噬細(xì)胞提?。ê喴f明）

⒈骨髓巨噬細(xì)胞的提取相對復(fù)雜，通常涉及以下步驟：

⒉小鼠處理?：處死小鼠后，去除腿部皮膚和肌肉，暴露股骨和脛骨。

⒊骨髓沖洗?：用注射器吸取含雙抗的細(xì)胞培養(yǎng)基沖洗骨髓腔，收集骨髓細(xì)胞。

?⒋細(xì)胞分離與培養(yǎng)?：通過密度梯度離心、紅細(xì)胞裂解等方法去除雜質(zhì)細(xì)胞，將骨髓細(xì)胞接種至培養(yǎng)瓶中，在含有特定細(xì)胞因子（如MCSF）的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)其分化為巨噬細(xì)胞。

三、注意事項

?⒈無菌操作?：整個操作過程中需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范以防止污染。

⒉細(xì)胞活性?：確保使用的試劑和培養(yǎng)基適合巨噬細(xì)胞的生長和功能維持。

⒊培養(yǎng)條件?：控制培養(yǎng)箱的溫度、濕度和CO2濃度等參數(shù)以提供適宜的生長環(huán)境。

⒋細(xì)胞觀察?：定期觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)和形態(tài)變化以便及時調(diào)整培養(yǎng)條件。

以上是以小鼠為例的巨噬細(xì)胞原代提取方法的簡要介紹，具體步驟可能因?qū)嶒灄l件和需求而有所調(diào)整。

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