
DC細(xì)胞檢測
樹突狀細(xì)胞(DC)的主要功能是吸收抗原,進(jìn)行加工,并向T淋巴細(xì)胞呈遞。其它抗原呈遞細(xì)胞也有此功能,如B淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。 我們常用的檢測指標(biāo): 樹突狀細(xì)胞(人): CD83、CD141、、CD209、MHC II 樹突狀細(xì)胞(鼠):CD11c、MHC II
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實驗介紹
【技術(shù)原理】
流式利用不同熒光物質(zhì)標(biāo)記的單克隆抗體,與待測成分作用,然后上流式細(xì)胞儀檢測待測細(xì)胞。待測細(xì)胞隨流動室內(nèi)的流動鞘液排列成單列,一個個迅速通過激光聚焦區(qū),激光在對每個細(xì)胞進(jìn)行照射時可同時得到前向角散射和側(cè)向角散射2種散射光以及激發(fā)熒光標(biāo)記物發(fā)出的信號,利用這些信號,可計算出相對含量,從而得到細(xì)胞群的相對比值。
樹突狀細(xì)胞(DC)的主要功能是吸收抗原,進(jìn)行加工,并向T淋巴細(xì)胞呈遞。其它抗原呈遞細(xì)胞也有此功能,如B淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。
我們常用的檢測指標(biāo):
樹突狀細(xì)胞(人): CD83、CD141、、CD209、MHC II
樹突狀細(xì)胞(鼠):CD11c、MHC II
【實驗流程】
組織:制成單細(xì)胞懸液-溶血-離心去上清-調(diào)整細(xì)胞密度-加入相應(yīng)的標(biāo)記抗體-孵育-離心去上清-上機
血液:溶血-離心去上清-調(diào)整細(xì)胞密度-加入相應(yīng)的表面標(biāo)記抗體-孵育-離心去上清-上機
案例展示

注意事項
由于血液和組織中DC細(xì)胞含量少,且缺乏特異的DC標(biāo)記物,所以DC細(xì)胞的研究非常困難。因此,關(guān)于DC細(xì)胞的了解主要來自于通過密度梯度離心、培養(yǎng)、和/或陰性選擇富集后的DC細(xì)胞的研究。
這些過程利用了DC細(xì)胞的密度和黏附特征,和在一定細(xì)胞因子條件下的選擇性生長,或缺乏淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和粒細(xì)胞的系列標(biāo)記物的表達(dá)。但是,這些方法中DC細(xì)胞的產(chǎn)率和純度較低,且費時費力。而且,這些操作可以影響細(xì)胞的功能,并且無法做DC細(xì)胞含量的定量分析。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 運輸條件 |
|---|---|---|
| 組織 | 離體后組織制成單細(xì)胞懸液,加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運輸 |
| 活細(xì)胞 | 樣本量:1*106個細(xì)胞/TEST,加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運輸 |
| 血液 | 將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內(nèi) | 常溫運輸 |
